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模式與轉基因動物
條件性基因敲除鼠

時間:2020-07-17 16:43:00 瀏覽:1673次


技術原理:

CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)最新出現的一種由RNA指導Cas核酸酶對靶向基因進行特定DNA修飾的技術。CRISPR是細菌和古細菌為應對病毒和質粒不斷攻擊而演化來的獲得性免疫防御機制。在這一系統中,crRNA(CRISPR-derived RNA)通過堿基配對與tracrRNA(trans-activating RNA)結合形成雙鏈RNA,此tracrRNA/crRNA二元復合體指導Cas9蛋白在crRNA引導序列靶定位點剪切雙鏈DNA達到對基因組DNA進行修飾的目的。CRISPR/Cas9系統能夠對小鼠和大鼠基因組特定基因位點進行精確編輯, 目前已經成功應用于大、小鼠基因KO/KI的模型制備。


技術特點:

(1)無物種限制

(2)靶向精確性更高

(3)可實現對靶基因多個位點同時敲除

(4)基因調控方式多種多樣

(5)修飾效率高,實驗周期短

條件性基因敲除通常利用“Cre-LoxP”系統實現。首先把兩個LoxP位點插入到目的基因的一個或幾個重要外顯子的兩端,以制備出有兩個Loxp位點的floxed小鼠。floxed小鼠在與表達Cre重組酶小鼠雜交之前,該基因正常表達;當floxed小鼠與組織特異性表達Cre酶的小鼠進行雜交后,可實現在特定的組織或細胞中敲除該基因,而在其它組織或細胞中該基因表達正常。

建系原則與流程:

1、與野生型小鼠雜交:陽性CRISPR-Pro小鼠(+/flox)與野生型小鼠(+/+)雜交,獲得F1代雜合子小鼠(+/flox);

2、挑選一對F1代雜合子小鼠(+/flox)進行自交,獲得F2代純合子小鼠(flox/flox)。


報告基因(Reporter/Tag)小鼠模型

指在目的基因的位置引入報告基因(如EGFP、mRFP、mCherry、mYFP或LacZ等)或標記基因的小鼠模型,通過報告基因的表達監控目的基因啟動子的轉錄活性、監控目的蛋白的表達定位及細胞轉運。

人源化(Humanized)小鼠模型

指帶有功能性的人類基因、細胞、組織或器官的小鼠模型,通常被用做人類疾病體內研究的活體替代模型。本服務內容涉及到的是指帶有功能性人類基因的小鼠模型。

Rosa26位點基因敲入小鼠模型

指在Rosa26位點引入某種基因的轉基因小鼠模型。傳統的轉基因小鼠一般通過利用質粒進行受精卵原核注射的方式來制備,通常會得到多個品系(Founders)。不同品系由于質粒在染色體上的整合位點不同、拷貝數不同,不同品系之間不容易得到一致的結果。而且由于轉基因小鼠傳代后,轉基因的拷貝數稀釋以及基因沉默等原因,同一品系的表型在傳代過程中也很容易丟失,造成實驗結果不能重復?,F在大部分實驗室都是通過定點轉基因的方式來制備轉基因小鼠。其中用的最多的位點是Rosa26位點。

條件性點突變小鼠模型-誘導性(Inducible)

指在誘導劑的作用下,點突變能在特定的時間點被引入特定細胞或組織中目的基因位置的動物模型。誘導前表達野生型蛋白;誘導后,突變的蛋白在全身所有特定的細胞或組織中表達。


威斯騰實驗服務流程



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分子生物學檢測 蛋白質與免疫學 動物實驗
實時熒光定量PCR 單克隆抗體制備 帕金森疾病模型
免疫共沉淀(Co-IP 多克隆抗體制備 抑郁癥動物模型
ELISA(酶聯免疫吸附法)技術 Western-blot 實驗服務 脊髓損傷模型
生化指標檢測 蛋白雙向電泳實驗服務 腦外損傷模型
雙熒光素酶報告基因檢測 原核蛋白表達純化 骨神經損傷模型
染色質免疫共沉淀(ChIP 真核蛋白表達純化 心肌缺血模型
GST pull Down ITRAQ定量蛋白質組學 心力衰竭模型
SLAC蛋白組學 肺動脈高血壓動物模型
高血壓模型
病毒包裝 實驗課題整體外包 粥樣動脈硬化模型
過表達/干擾慢病毒包裝純化 整體課題外包 大腦中動脈阻塞模型
過表達/干擾腺病毒包裝純化 細胞整體實驗外包 慢性之氣管炎模型
逆轉錄病毒包裝純化 動物整體實驗外包 過敏性哮喘模型
腺相關病毒包裝純化 肺炎大鼠模型
肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片 原代細胞培養 肝纖維化模型
細胞因子芯片 骨髓間充質干細胞培養 膽結石模型
BioPlex懸浮芯片 脂肪干細胞培養 急性胰腺炎模型
生長因子芯片 心肌成纖維細胞培養 急性腎衰竭模型
炎癥因子芯片 軟骨細胞培養 體內血栓模型
血管生成因子芯片 血管內皮細胞培養 關節炎模型
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電生理相關服務 動物整體實驗服務
膜片鉗實驗
細胞生物學檢測 高通量測序 代謝組學
細胞原代培養 mRNA測序 氣相色譜GC/MS
MTT檢測 LncRNA測序 液相色譜LC/MS
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細胞周期檢測 RNA-Seq測序
細胞克隆形成實驗 外顯子測序 影像學相關實驗
Transwell細胞遷移/侵襲 16s擴增子測序 Micro-CT
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掃描電鏡 基因定點突變細胞系 LncRNA芯片
透射電鏡 單基因敲除細胞系 miRNA芯片
HE染色 多基因敲除細胞系 mRNA芯片
免疫組化 目的基因敲入細胞系 甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
Tunel(原位末端凋亡法)檢測 報告基因敲入細胞系 SNP芯片(限人和小鼠來源樣本)
激光共聚焦 miRNA/LncRNA敲除細胞系
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熒光原位雜交 基因敲入大鼠/小鼠
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【本平臺合作項目】
分子生物學、細胞生物學、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學檢測、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務!
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