在線客服
在線客服
服務時間:8:30~17:30
客服熱線
400-675-6758
客服服務熱線
關注微信

威斯騰公眾號

成功案例
基因敲除小鼠的繁育鑒定

時間:2020-08-05 10:38:00 瀏覽:3581次



1. Product Information

Name

C57BL/6-XXXtm1cyagen

Serial Number

KOCMP-21018-XXX

Gene

XXX

NCBI ID

18024

Strain

C57BL/6

Type

conventional knockout

2. gRNA target sequence

gRNA1 (matching forward strand ofgene): CAGCCCTTGGTTAGCAGCGCAGG

gRNA2 (matching forward strand of gene): TTCTATACTAAACGTTAGCTAGG

3. Delivery Information

 4. Genotyping Strategy

5. PCR Screening

Animals 2 and 6 were identified positive by PCR screening.

Note:

1)PCR was carried out in 25 μL volume for 35 cycles under standard conditions, with primers listed above added to each reaction.


 2) Taq DNA polymerase used was P112-01.



 3) Two controls used in PCR genotyping are:


 ? Water control: No DNA template added.


 ? Wildtype control: 400 ng of mouse genomic DNA.  



6. Sequencing Confirmation


Sequencing Primer for PCR product:

Sequence primer (F1): 5’-GAAGCATTATCATTTGGTGGGAAC-3’


Sequencing Results:


Positive animals

Mouse ID: 2, 6 (Deleted 4961 bp and inserted 28 bp)

7. Breeding and Genotyping strategy

8. 配種與繁殖匯總

小鼠配種與繁殖情況如下圖所示。

1+/+DNA雙鏈都含有XXX基因,即野生型小鼠;+/-為只有一條DNA鏈含有XXX基因,即雜合子小鼠;-/-DNA雙鏈都不含XXX基因,即純合子小鼠。

       (2)紅色字體標記表示純合子小鼠,藍色字體標記表示小鼠已死亡。

      PCR鑒定

     (1)5/9,2#,6#鑒定。

     根據圖一,說明:2-1、6-1用引物F1/R1進行PCR;2-2、6-2用引物F1/R2進行PCR。鑒定結果:2#,6#為雜合子。

      (2)5/19,7#~13#鑒定。

       根據圖二,說明:前面是用引物F1/R1進行PCR;后面是用引物F1/R2進行PCR。鑒定結果:7#、9#、10#為純合子;11#、12#、13#為雜合子;8#為野生小鼠。其中11#引物F1/R1條帶不明顯,后續重新取材鑒定。

校花奶头好大揉得好爽,主人拽奶头跪爬鞭打羞辱调教,116亚洲大胆裸体艺术全集,美女mm131爽爽爽作爱视频
国产小屁孩cao大人xxxx| 色欲日日拍夜夜嗷嗷叫| 永久免费观看美女裸体的网站|